
斑馬魚模型良好的生物學(xué)特性使其很適合高通量和高內(nèi)涵藥物篩選, 是傳統(tǒng)藥物開發(fā)模式的重要補(bǔ)充。利用斑馬魚快速篩選候選藥物的活性和副作用,可以在藥物開發(fā)的極早期降低開發(fā)風(fēng)險(xiǎn),大幅節(jié)省成本,縮短藥物開發(fā)周期,提高成功率。
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1、Q:請(qǐng)教老師,我設(shè)計(jì)的sgRNA?與非靶序列相似度多大時(shí)會(huì)把這個(gè)非靶標(biāo)基因也編輯了?是否可以理解為:在遠(yuǎn)離pam端有4個(gè)及以內(nèi)的與靶序列不同堿基的序列都是可以被編輯的。即脫靶到了那些序列。A:有脫靶機(jī)會(huì),但通常識(shí)別活性會(huì)比較低,一般地,脫靶是需要盡量避免的。如果想要敲除兩個(gè)以上基因,需要針對(duì)要敲除的基因分別設(shè)計(jì)crispr以制備不同的sgRNA。?2.Q:crispr/Cas13在gRNA設(shè)計(jì)
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基因編輯質(zhì)粒的相關(guān)問(wèn)題討論-南京堯順禹斑馬魚基因編輯
基于基因編輯質(zhì)粒的相關(guān)問(wèn)題討論1、Q:利用crsipr敲除,可以用瞬轉(zhuǎn)質(zhì)粒嘛?A:可以!這樣做得到的細(xì)胞是mosaic,即有的細(xì)胞是基因組編輯了,有的則沒(méi)有;有的細(xì)胞基因敲除了,有點(diǎn)則沒(méi)有。如果只要改變部分細(xì)胞基因即可的話,則可以通過(guò)瞬轉(zhuǎn),如以原代細(xì)胞為研究對(duì)象。?2、Q:保存領(lǐng)到的質(zhì)粒和菌液,說(shuō)明書上說(shuō)質(zhì)粒保存溫度-20℃/-80℃,怎么決定?我把領(lǐng)到的裝質(zhì)粒和菌液的離心管插到一個(gè)管插上直接放進(jìn)
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